Amantadine ELISA Kit For Chicken Pork Duck diagnostique 96 Wells/Kit Sensitivity 0,2 Ppb

Amantadine ELISA Test Kit pour Poulet Porc Canard 96 Puits/Kit Sensibilité 0,2 ppb

 

1. Principe

Ce kit de test est basé sur le test immunoenzymatique compétitif pour la détection de l'amantadine.L'antigène de couplage est pré-enduit sur les bandes de micropuits.L'amantadine dans l'échantillon et les antigènes de couplage pré-enduits sur les bandes de micropuits entrent en compétition pour les anticorps anti-amantadine.Après l'addition du conjugué enzymatique, le substrat TMB est ajouté pour la coloration.La valeur de densité optique (DO) de l'échantillon a une corrélation négative avec l'amantadine dans l'échantillon.Cette valeur est comparée à la courbe standard et les résidus Amantadine sont ensuite obtenus.

 

2. Spécifications techniques

Sensibilité : 0,2 ppb
Température de l'incubateur : 25℃
Temps d'incubateur : 30min～15min

Limite de détection:
Poulet, canard 0,2 ppb

Taux de réaction croisée :
Amantadine 100%

Taux de récupération:
Poulet, canard 90±25%

 

3. Composants

 

1	Barrettes de micropuits	12 barrettes de 8 puits amovibles chacune
2	6× solution étalon (1 ml chacune)	0ppb	0,2 ppb
		0,8 ppb	3,2 ppb
		12,8 ppb	51,2 ppb
3	Conjugué enzymatique	7ml	une casquette rouge
4	Solution de travail d'anticorps	7ml	casquette bleue
5	Substrat A	7ml	Bonnet blanc
6	SubstratB	7ml	casquette noire
sept	Solution d'arrêt	7ml	casquette jaune
8	Extracteur	50 ml * 2	bouchon transparent
9	Tampon de lavage concentré 20×	15ml	Bonnet blanc
dix	Solution de redissolution concentrée 5×	10ml	Bonnet blanc

 

4. Matériel nécessaire mais non fourni

 

1) Équipement : lecteur ELISA (450 nm/630 nm), homogénéisateur, agitateur, centrifugeuse, balance : 0,01 g sensible à la quantité, dispositif de séchage à l'azote, incubateur, pipettes graduées, imprimante

2) Micropipettes : monocanal 20 ml ~ 200 ml, 100 ml ~ 1000 ml, multicanal 30~300 μl

3) Réactifs : Acétonitrile, n-hexane.

 

5. Prétraitement de l'échantillon

 

Instructions (Les points suivants doivent être traités avant le prétraitement)

1) Seuls les embouts jetables peuvent être utilisés pour les expériences et les embouts doivent être changés lorsqu'ils sont utilisés pour absorber différents réactifs ;

2) Avant l'expérience, chaque ustensile expérimental doit être propre et doit être re-nettoyé si nécessaire, afin d'éviter la contamination qui interfère avec les résultats expérimentaux.

 

Préparation de la solution avant le prétraitement de l'échantillon :

1) Exemple de solution d'extrait

6 parties d'acétonitrile + 1 partie d'extracteur pour obtenir la solution d'extrait d'échantillon prête à l'emploi.

2) Solution de redissolution d'échantillon

Utiliser 1 partie de solution de redissolution concentrée (5X) et dissoudre avec 4 parties d'eau déminéralisée pour obtenir la solution de redissolution d'échantillon prête à l'emploi.

Préparation des échantillons

 

5.1 Préparation du poulet, échantillon de canard

1) Prenez 3,0 ± 0,05 g d'échantillon de tissu homogénéisé dans un tube à centrifuger de 50 ml ;ajouter 6 ml de solution d'extrait d'échantillon, agiter pendant 3 min, centrifuger à plus de 4 000 r/min à température ambiante (20 - 25 ℃) pendant 5 min ;

2) Prenez 2 ml de phase organique transparente dans un récipient sec, soufflez pour sécher avec de l'azote ou de l'air à 50 ~ 60 ℃ ;

3) Ajoutez d'abord 1 ml de n-hexane, puis ajoutez 0,5 ml de solution de redissolution d'échantillon, mélangez pendant 30 secondes, centrifugez à plus de 4 000 tr/min à température ambiante (20 - 25 ℃) pendant 5 min, jetez le n-hexane de la couche supérieure ;

4) Prenez 50 μl de liquide de couche inférieure pour tester

Facteur de dilution : 0,5

 

6. Procédures ELISA

 

6.1Instructions

1. Amener les réactifs ELISA à température ambiante (20 - 25 °C) avant utilisation.

2. Remettez les réactifs ELISA à 2-8 ℃ immédiatement après utilisation

3. La reproductibilité ELISA dans le processus d'analyse dépend en grande partie de la consistance de la plaque de lavage, le bon fonctionnement de la plaque de lavage est le point de détermination du programme ELISA

4. Dans tous les processus d'incubation à température constante, évitez l'exposition à la lumière, scellez la microplaque avec la membrane de couverture

 

6. 2 Procédures d'exploitation

1. Amener le kit de test à température ambiante (20-25 ℃) pendant au moins 30 min, notez que chaque réactif doit être agité uniformément avant utilisation ;

2. Placez les barrettes de micropuits requises dans les cadres de plaque.Refermer la microplaque inutilisée, stockée à 2-8 ℃, non congelée.

3. Préparation de la solution : diluer les 15 ml de tampon de lavage concentré 20 x avec de l'eau déminéralisée à 300 ml.

4. Numérotation : numéroter les micropuits en fonction des échantillons et de la solution standard ;chaque échantillon et solution standard doit être effectué en double ;enregistrer leurs positions.

5. Ajouter l'étalon/l'échantillon : Ajouter 50 µL de l'échantillon ou de la solution étalon dans des puits en double séparés, puis ajouter le conjugué enzymatique, 50 µL/puits ;puis solution de travail d'anticorps, 50 µL/puits.Mélanger doucement en agitant la plaque manuellement, sceller la microplaque avec la membrane de couverture, incuber à 25 °C pendant 30 min dans l'obscurité.

6. Lavage de la microplaque : ouvrir soigneusement la membrane du couvercle, verser le liquide du micropuits ;ajouter 250 µL/puits de tampon de lavage dilué, laver complètement 4 à 5 fois, 15 à 30 s à chaque fois, puis retirer et rabattre pour sécher avec du papier absorbant. (Utiliser une lance inutilisée pour percer la bulle après séchage)

7. Coloration : ajouter 50 µL de solution de substrat A puis 50 µL de solution B dans chaque puits.Mélanger doucement en agitant la plaque manuellement et incuber à 25 °C pendant 15 min dans l'obscurité pour la coloration.

8. Détermination : ajouter 50 µL de la solution d'arrêt dans chaque puits.Mélanger délicatement en secouant la plaque manuellement.Réglez la longueur d'onde du lecteur de microplaques à 450 nm pour déterminer la valeur OD de chaque puits.(Recommander de lire la valeur OD à la double longueur d'onde 450/630nm dans les 5 min).

 

7. Jugement du résultat

Il existe deux méthodes pour juger les résultats;le premier est le jugement approximatif, tandis que le second est la détermination quantitative.Notez que la valeur OD de l'échantillon a une corrélation négative avec l'amantadine dans l'échantillon

7.1 Détermination qualitative
La plage de concentration (ng/ml) peut être obtenue en comparant la valeur d'absorbance moyenne avec les standards.Supposons que la valeur d'absorbance de l'échantillon un est de 0,3, l'échantillon deux est de 1,0 et les normes sont : 0 ppb de 2,243 ;0,2 ppb de 2,054 ;0,8 ppb de 1,715 ;3,2 ppb de 1,074 ;12,8 ppb de 0,451 ;51,2 ppb de 0,155.Ensuite, la concentration de l'échantillon est comprise entre 12,8 ppb et 51,2 ppb ;L'échantillon deux est de 3,2 ppb ~ 12,8 ppb.La plage de concentration d'amantadine dans les échantillons peut être obtenue en la multipliant par la dilution correspondante de l'échantillon.
 

7. 2 Analyse quantitative
Afin de calculer la concentration des échantillons, une courbe standard doit être réalisée.Avant de créer une courbe standard, le concept de % d'absorbance doit être connu.
Calcul du % d'absorbance :

 

Pourcentage de la valeur d'absorbance =	B	×100 %
	B0

 

B - la valeur moyenne de la DO de l'échantillon ou de la solution standard
B0—la valeur moyenne de la DO de la solution standard à 0 ng/mL
L'étalon zéro est ainsi rendu égal à 100 % et les valeurs d'absorbance sont indiquées en pourcentages.Les valeurs calculées pour les étalons sont saisies dans un système de coordonnées sur papier quadrillé semi-logarithmique en fonction de la concentration d'amantadine [ng/mL].La concentration d'amantadine en ng/mL (ppb) correspondant à l'absorbance de chaque échantillon peut être lue sur la courbe d'étalonnage.
Un logiciel spécial pour l'analyse des résultats d'ELISA facilitera les déterminations doubles ou multiples.Si vous avez besoin, veuillez appeler pour demander.

 

8. Précautions

 

1. La valeur OD standard sera faible si la température ambiante est inférieure à 25 ℃ ou la température du réactif et que l'échantillon n'est pas revenu à la température ambiante (20-25 ℃).
2. La microplaque est séchée pendant le processus de lavage, qui s'accompagnera d'une non-linéarité de la courbe standard et d'une mauvaise reproductibilité ;par conséquent, passez à l'étape suivante immédiatement après le lavage.
3. Bien mélanger avant d'ajouter des réactifs.
4. La solution d'arrêt est une solution d'acide sulfurique 2M, évitez tout contact avec la peau.
5. Ne pas utiliser le kit au-delà de la date de péremption.L'utilisation de réactifs dilués ou frelatés du kit peut entraîner des modifications des valeurs de sensibilité et de détection OD.Ne remplacez pas les réactifs dans différents lots de kits.
6. Stockage : Conserver à 2-8°C, ne pas congeler.Refermer les microplaques inutilisées dans des sachets auto-scellants.Les matériaux standard et les coupleurs incolores sont sensibles à la lumière et ne peuvent pas être directement exposés à la lumière.
7. Jetez toute solution de teinture dont la couleur indique que la solution s'est dégradée.La valeur de détection (450/630nm) de la solution standard 0 (0 ppb) est inférieure à 0,5 ((A450nm<0,5)) indiquant sa dénaturation.
8. La température de réaction optimale est de 25℃.Si la température est trop élevée ou trop basse, la sensibilité de détection et la valeur OD changeront.

 

9. Stockage et date de péremption

Stockage : stocker à 2-8 ℃, non congelé.
Date d'expiration : 12 mois ;la date de production est sur la boîte.
Remarque : si l'emballage sous vide de la microplaque présente des fuites, il est toujours valable d'utiliser, n'affecte pas le résultat du test, détendez-vous pour l'utiliser.

 

 

 

 

 

Q1 : Quand sera-t-il expédié ?
A1 : Nous expédierons les marchandises pour vous dès que possible dans les 7 jours ouvrables après réception du paiement.(En cas de facteurs externes tels que l'épidémie, la livraison peut être retardée)

 

Q2 : Prend-il en charge OEM/ODM ?
A2: Il peut être pris en charge, mais la quantité spécifique doit être supérieure à 100 000 pièces, ce qui est pratique pour les produits personnalisés.

 

Q3 : Comment se porte votre usine en termes de contrôle qualité ?
A3 : Nous avons certifié ISO9001 et ISO13485 à l'échelle nationale.Notre processus de production est conforme aux procédures standard pour assurer une qualité de produit optimale.

 

Q4 : Comment assurer le service après-vente ?
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Q5 : Quelle est la méthode de paiement ?
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Q6 : Comment expédier ?
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