Sensibilité 0.01ppb 96Wells/Kit du nitrofuranne AOZ Kit Test ELISA For Fish Shrimp Honey

Nitrofuranne AOZ ELISA Test Kit pour la crevette Honey Sensitivity 0.01ppb 96Wells/Kit de poissons

 

1. Principe

Ce fkit rapide d'essai de sécurité d'oodest basé sur l'immunoessai concurrentiel d'enzymes pour la détection d'AOZ dans l'échantillon. Les antigènes de accouplement sont enduits d'un préenduisage sur les rayures micro-bien. Les AOZ dans l'échantillon et les antigènes de accouplement enduits d'un préenduisage sur les rayures micro-bien concurrencent pour les anti-AOZ anticorps. Après que l'addition du conjugué d'enzymes, le substrat de TMB soit ajoutée pour la coloration. La valeur de la densité optique (OD) de l'échantillon a une corrélation négative avec l'AOZ dans elle. Cette valeur est comparée à la courbe standard et la concentration d'AOZ est plus tard obtenue.

2. Composants

1	Bandes micro-bien	12 bandes avec 8 démontables puits pièce
2	solution étalon 6× (1mL chacun)	0ppb	0.01ppb
		0.03ppb	0.09ppb
		0.27ppb	0.81ppb
3	Conjugué d'enzymes	7ml	chapeau rouge
4	Solution de fonctionnement d'anticorps	7ml	chapeau bleu
5	Substrat A	7ml	chapeau blanc
6	SubstrateB	7ml	chapeau noir
7	Arrêtez la solution	7ml	chapeau jaune
8	20× a concentré le tampon de lavage	40ml	chapeau blanc
9	2× a concentré redissoudre la solution	50ml	chapeau transparent
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	chapeau noir

 

3. Spécifications techniques

Sensibilité : 0.01ppb

La température d'incubation : 25℃

Temps d'incubation : 30min~15min

Limite de détection

Tissu, oeuf, miel : 0.05ppb

Taux de réaction croisée

AOZ 100%

AMOZ <0>

AHD <0>

SEM <0>

Taux de récupération

Tissu, oeuf 95±25%

Miel 85±23%

 

4. Matériaux requis mais non fournis

1) Équipements : le lecteur de microplate, imprimante, homogénisateur, dispositif d'azote-séchage, vortex, centrifugeuse, mesurant introduit à la pipette, l'équilibre (une sensibilité réciproque de 0,01 g), incubateur, bain d'eau ;

2) Micropipettors : µL 20-200 µL à canal unique, 100-1000, et µl 30~300 multicanal ;

3) Réactifs : NaOH, acétate éthylique, n-hexane, HCI (36,5% approximatifs), K2HPO4·3H2O

 

5. Traitement préparatoire d'échantillon

Instructions

Les points suivants doivent être traités avant le traitement préparatoire du genre d'échantillon :

1) Seulement les astuces jetables peuvent être employées pour les expériences et les astuces doivent être changées une fois utilisées pour absorber différents réactifs ;

2) Avant l'expérience, chaque équipement expérimental doit être propre et devrait re-être nettoyé s'il y a lieu, afin d'éviter la contamination qui interfère les résultats expérimentaux.

Préparation de solution avant traitement préparatoire d'échantillon :

1) 0,1 M K2HPO4 : dissolvez g 11,4 K2HPO4·3H2O dans l'eau désionisée à 500mL.

2) 1 M HCl : dissolvez 8.6mL HCI (36,5% approximatifs) dans l'eau désionisée à 100mL.

3) NaOH de 1 M : dissolvez NaOH 4g dans l'eau désionisée à 100mL.

4) le 2×concentrated redissolvant la solution est dilué avec de l'eau désionisé au 1:1 (1mL a concentré redissoudre la solution + l'eau désionisée par 1mL), utilisé pour redissoudre d'échantillon.

 

5,1 préparation témoins

a)Tissu, oeuf

1) Pesez 1± 0.05g de l'échantillon homogénéisé, ajoutez 4mL de l'eau distillée, 0.5mL 1 M HCI et 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) à chaque tube, secouent correctement pour 2min ;.

2) Incubez at37℃ au-dessus de nuit (heures approx16) ou incubez at56℃ par le bain d'eau (2 heures).

3) Ajoutez 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M et 6mL l'acétate éthylique à chaque tube, secousse pour 30s.

4) Centrifugeuse à 4000r/min ci-dessus à la température ambiante (℃ 20-25) pour 10min (s'il y a d'émulsification ou la couche d'acétate éthylique n'est pas assez pour 3ml, n'incube pas l'échantillon au bain d'eau de 80 ℃ pour 10min et centrifugeuse à plusieurs reprises ; ou augmentez la vitesse et prolongez la période de la centrifugeuse).

5) Transfert 3mL de la couche d'acétate éthylique dans un nouveau tube centrifuge et s'évaporer à sec par l'azote ou avion à 50℃.

6) Dissolvez les résidus secs en n-hexane 2mL, ajoutez 1mL de la solution redissolvante diluée, mélange correctement pendant 30 secondes, centrifugeuse à au-dessus de 4000 r/min à la température ambiante (℃ 20-25) pour la minute 10 ; Enlevez la phase de n-hexane de -couche (s'il y a d'émulsification, après élimination de la phase de n-hexane de -couche, incube l'échantillon au bain d'eau de 70 ℃ pour 10-20min, le centrifuge à plusieurs reprises).

7) Prenez à 50 le µL du inférieur pour l'analyse.

Pli de la dilution de l'échantillon : 2

 

b) Miel

1) Pesez 2± 0.05g de l'échantillon homogénéisé (miel), ajoutez 4mL de l'eau distillée, 0.5mL 1 M HCI et 100 le µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) à chaque tube, secouent correctement pour 2min ;.

2) Incubez at37℃ au-dessus de nuit (heures approx16) ou incubez at56℃ par le bain d'eau (2 heures).

3) Ajoutez 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M et 6mL l'acétate éthylique à chaque tube, secousse pour 30s.

4) Centrifugeuse à 4000r/min ci-dessus à la température ambiante (20-25℃) pour 10min (s'il y a d'émulsification ou la couche d'acétate éthylique n'est pas assez pour 3ml, n'incube pas l'échantillon au bain d'eau de 80 ℃ pour 10min et centrifugeuse à plusieurs reprises ; ou augmentez la vitesse et prolongez la période de la centrifugeuse).

5) Transfert 3mL de la couche d'acétate éthylique dans un nouveau tube centrifuge et s'évaporer à sec par l'azote ou avion au ℃ 50.

6) Dissolvez les résidus secs en n-hexane 2mL, ajoutez 1mL de la solution redissolvante diluée, mélange correctement pendant 30 secondes, centrifugeuse à au-dessus de 4000r/min à la température ambiante (℃ 20-25) pour la minute 10 ; Enlevez la phase de n-hexane de -couche (s'il y a d'émulsification, après élimination de la phase de n-hexane de -couche, incube l'échantillon au bain d'eau de 70 ℃ pour 10-20min, le centrifuge à plusieurs reprises).

7) Prenez à 50 le µL du inférieur pour l'analyse.

Pli de la dilution de l'échantillon : 1

 

6. Procédures d'ELISA

6,1 Instructions

1) Apportez tous les réactifs et bandes micro-bien à la température ambiante (℃ 20-25) avant emploi ;

2) Renvoyez tous les réactifs au ℃ 2-8 juste après l'utilisation ;

3) La reproductibilité de l'analyse d'ELISA, dans une large mesure, dépend de la cohérence du lavage de plat. L'opération correcte du lavage de plat est le point clé dans ELISA les procédures ;

4) Pour l'incubation aux températures constantes, tous les échantillons et réactifs doivent éviter l'exposition à la lumière, et chaque microplate devrait être scellé par la membrane de couverture.

 

6,2 Procédures d'opération

1) Apportez le kit d'essai à la température ambiante (℃ 20-25) pour au moins la minute 30, notez que chaque réactif doit être secoué pour se mélanger également avant emploi, mettez les bandes micro-bien requises dans des cadres de plat. A rescellé le microplate inutilisé, magasin au ℃ 2-8, non congelé.

2) Préparation de solution : 40mL dilué du tampon de lavage concentré 20 par × avec de l'eau désionisé à 1h19 1 (tampon de lavage concentré par × de 1 partie 20 + 19 parts d'eau désionisée). Ou préparez comme nécessaire.

3) Numérotation : nombre les micro-puits selon les échantillons et la solution étalon ; chaque échantillon et solution étalon devraient être exécutés en double, enregistrent leurs positions.

4) Ajoutez le µL 50 de l'échantillon ou de la solution étalon dans les puits en double distincts ; additionnez 50 que l'enzyme d'UL conjuguent alors le µL 50 de la solution de fonctionnement d'anticorps dans chaque puits, mélange doucement en secouant le plat manuellement. Scellez le microplate avec la membrane de couverture, andincubate 25 au ℃ for30min.

5) Versez le liquide hors du microwell, aileron pour sécher sur le papier absorbant, ajoutez 250 µL/well de tampon de lavage pour laver le microplate pour 15-30 s, puis sortez et agitez-vous pour sécher avec le papier absorbant, répétez 4-5 fois. (S'il y a les bulles après le battement, les a coupées avec les astuces propres).

6) Coloration : ajoutez le µL 50 le µL du substrat A et puis 50 du substrat B dans chaque puits. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement, puis incubez 25 au ℃ for15min à l'obscurité pour la coloration.

7) Détermination : additionnez 50 que le µL du arrêtent la solution dans chaque puits. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement. Placez la longueur d'onde du lecteur de microplate à 450nm pour déterminer la valeur d'OD de chaque puits. (Recommandez de lire la valeur d'OD au 450/630nm à double longueur d'onde d'ici 5 minutes).

 

7. Jugement de résultat

Il y a deux méthodes pour juger les résultats : le premier est le jugement approximatif, alors que le deuxième est la détermination quantitative. Note que la valeur d'OD de l'échantillon a une corrélation négative avec la concentration d'AOZ.

7,1 détermination qualitative

La gamme de concentration (ng/mL) d'AOZ peut être obtenue à partir de comparer la valeur moyenne d'OD de l'échantillon à celle de la solution étalon. Supposer que la valeur d'OD de l'échantillonⅠ est 0,3, et ce du Ⅱ témoin est 1,0, la valeur d'OD des solutions étalons est : 2,243 pour 0ppb, 1,816 pour 0.01ppb, 1,415 pour 0.03ppb, 0,74 pour 0.09ppb, 0,313 pour 0.27ppb, 0,155 pour 0.81ppb, en conséquence la gamme de concentration du Ⅰ témoin est 0.27ppb à 0.81ppb, et ce du Ⅱ témoin est 0.03ppb à 0.09ppb.

7,2 détermination quantitative

Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance est obtenues pour la valeur moyenne d'OD (b) de l'échantillon et de la solution étalon divisés par la valeur d'OD (B0) de la première solution étalon (0 normes) et plus tard multipliés d'ici 100%, c.-à-d.,

 

Pourcentage de valeur d'absorbance =	B	×100%
	B0

 

Valeur de la moyenne OD de B-the de l'échantillon ou de la solution étalon

Valeur de la moyenne OD de B0-the des 0 solutions étalons de ng/mL

Dessinez la courbe standard avec les pourcentages d'absorption de la solution étalon et les valeurs de semilogarithm de la solution étalon d'AOZ (ng/mL) comme y et axe des abscisses, respectivement. Lisez la concentration correspondante de l'échantillon provenant de la courbe standard en incorporant son pourcentage d'absorption dans la courbe standard. La valeur en résultant est plus tard multipliée par le pli correspondant de dilution, obtenant finalement la concentration d'AOZ dans l'échantillon.

 

8. Précautions

1) La température ambiante en-dessous du ℃ 25 ou la température des réactifs et des échantillons n'étant pas retourné à la température ambiante (℃ 20-25) mènera à une valeur standard plus basse d'OD.

2) La sécheresse du microplate dans le procédé de lavage sera accompagnée des situations comprenant les courbes standard non linéaires et la reproductibilité indésirable ; Continuez ainsi à la prochaine étape juste après le lavage.

3) Mélangez également, autrement il y aura la reproductibilité indésirable.

4) La solution d'arrêt est la solution acide sulfurique de 2 M, évitent d'entrer en contact avec la peau.

5) N'employez pas le kit dépassant sa date d'échéance. L'utilisation des réactifs dilués ou frelatés des kits mènera aux variations de la sensibilité et des valeurs de détection d'OD. N'échangez pas les réactifs des kits de différents sorts pour employer.

6) Mettez le microplate inutilisé dans un sac d'automatique-cachetage pour le resceller. La solution étalon et la couleur sans couleur anciennes est sensible à la lumière, et elles ne peuvent pas être directement exposées ainsi à la lumière.

7) Jetez la solution de coloration avec n'importe quelle couleur qui indique la dégénérescence de cette solution. La valeur de détection de la solution étalon 1 (0 ppb) de moins de 0,5 indique sa dégénérescence.

8) La température optima de réaction est le ℃ 25, et les températures trop élevées ou si basses auront comme conséquence les variations de la sensibilité de détection et des valeurs d'OD.

 

9. Date de stockage et d'échéance

Stockage : magasin au ℃ 2-8, non congelé.

Date d'échéance : 12 mois ; la date de la production est sur la boîte.

Note : Si l'emballage sous vide du microplate a la fuite, il est encore valide pour employer, n'affectent pas le résultat d'essai, soit de détendre pour employer.

 

 

Q1 : Combien de temps prendra-t-il pour que vous transportiez-vous ?
A1 : Habituellement bateaux dans un délai de 7 jours ouvrables.

 

Q2 : Soutenez-vous OEM/ODM ?
A2 : peut être soutenu. Nous pouvons adapter aux besoins du client selon les vos besoins spécifiques et quantités spécifiques.

 

Q3 : Comment votre usine va-t-elle en termes de contrôle de qualité ?
A3 : Nous avons la certification ISO9001 et ISO13485 la certification, jusqu'ici tout le processus de fabrication, nous avons des règles standard, nous nous conformons au comportement et aux lois appropriés du gouvernement.

 

Q4 : Le service après-vente est-il garanti ?
A4 : Nous fournissons le service après-vente technique en ligne professionnel. Si le produit échoue pendant l'expérience, nous pouvons fournir
conseils linéaires par le téléphone, la vidéo et d'autres formes.

 

Q5 : Quelle est votre quantité d'ordre minimum ?
A5 : 1Kit.

 

Q6 : Quelle est la méthode de expédition ?
A6 : Il peut être embarqué par exprès (FEDEX, UPS, DHL, SME, etc.) ou par l'air et la terre. Confirmez svp avec nous avant de passer une commande.