Anticorps du nitrofuranne AHD ELISA Food Rapid Test Kit pour la sensibilité 0.04ppb 96Wells/Kit de lait

Nitrofuranne AHD ELISA Food Safety Test Kit pour la sensibilité 0.04ppb 96Wells/Kit de lait

 

1. Principe du nitrofuranne AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Ce kit d'essai est basé sur l'immunoessai concurrentiel d'enzymes pour la détection d'Aminohydantion (AHD) dans l'échantillon. Les antigènes de accouplement sont enduits d'un préenduisage sur les rayures micro-bien. L'Aminohydantion (AHD) dans l'échantillon et les antigènes de accouplement enduits d'un préenduisage sur les rayures micro-bien concurrencent pour les anti-AHD anticorps. Après que l'addition du conjugué d'enzymes, le substrat de TMB soit ajoutée pour la coloration. La valeur de la densité optique (OD) de l'échantillon a une corrélation négative avec l'AHD dans elle. Cette valeur est comparée à la courbe standard et la concentration d'AHD est plus tard obtenue.

 

2. Spécifications techniques du nitrofuranne AHD ELISA Food Safety Test Kit

 

Sensibilité : 0.04ppb

La température d'incubation : 25℃

Temps d'incubation : 30min~15min

Tissu de limite de détection, oeuf, miel : 0.1ppb

Taux de réaction croisée

AHD 100%

AMOZ < 0="">

AOZ < 0="">

SEM < 0="">

Taux de récupération

Tissu, oeuf 95±25%

Miel 75±25%

 

3. Composants

 

1	Bandes micro-bien	12 bandes avec 8 démontables puits pièce
2	solution étalon 6× (1 ml chacun)	0ppb	0.04ppb
		0.12ppb	0.36ppb
		1.08ppb	3.24ppb
3	Conjugué d'enzymes	7ml	chapeau rouge
4	Solution de fonctionnement d'anticorps	7ml	chapeau bleu
5	Substrat A	7ml	chapeau blanc
6	SubstrateB	7ml	chapeau noir
7	Arrêtez la solution	7ml	chapeau jaune
8	20× a concentré le tampon de lavage	40ml	chapeau blanc
9	2× a concentré redissoudre la solution	50ml	chapeau transparent
10	2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3)	10ml	chapeau noir

 

4. Matériaux requis mais non fournis

 

1) Équipements : le lecteur de microplate, imprimante, homogénisateur, dispositif d'azote-séchage, vortex, centrifugeuse, mesurant introduit à la pipette, l'équilibre (une sensibilité réciproque de 0,01 g), incubateur, bain d'eau ;

2) Micropipettors : 20-200µL à canal unique, 100-1000µL, et 30~300µl multicanal ;

3) Réactifs : NaOH, acétate éthylique, n-hexane, HCI (36,5% approximatifs), K2HPO4·3H2O

 

5. Traitement préparatoire d'échantillon

 

Instructions

Les points suivants doivent être traités avant le traitement préparatoire du genre d'échantillon :

1) Seulement les astuces jetables peuvent être employées pour les expériences et les astuces doivent être changées une fois utilisées pour absorber différents réactifs ;

2) Avant l'expérience, chaque équipement expérimental doit être propre et devrait re-être nettoyé s'il y a lieu, afin d'éviter la contamination qui interfère les résultats expérimentaux.

Préparation de solution avant traitement préparatoire d'échantillon :

) des 0,1 M K2HPO4 : dissolvez 11.4g K2HPO4·3H2O dans l'eau désionisée à 500mL.

b) 1 M HCl : dissolvez 8.6mL HCI (36,5% approximatifs) dans l'eau désionisée à 100mL.

c) NaOH de 1 M : dissolvez NaOH 4g dans l'eau désionisée à 100mL.

d) le 2×concentrated redissolvant la solution est dilué avec de l'eau désionisé au 1:1 (1mL a concentré redissoudre la solution + 1 ml d'eau désionisée), utilisé pour redissoudre d'échantillon.

 

5,1 préparation témoins

a) Tissu, oeuf

1) Pesez 1± 0.05g de l'échantillon homogénéisé, ajoutez 4mL de l'eau distillée, 0.5mL 1 M HCI et 100µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) à chaque tube, secouent correctement pour 2min ;.

2) Incubez le ℃ at37 au-dessus de la nuit (heures approx16) ou incubez at56℃ par le bain d'eau (2 heures).

3) Ajoutez 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M et 6mL l'acétate éthylique à chaque tube, secousse pour 30s.

4) Centrifugeuse à 4000r/min ci-dessus à la température ambiante (℃ 20-25) pour 10min (s'il y a d'émulsification ou la couche d'acétate éthylique n'est pas assez pour 3ml, n'incube pas l'échantillon au bain d'eau 80℃ pour 10min et centrifugeuse à plusieurs reprises ; ou augmentez la vitesse et prolongez la période de la centrifugeuse).

5) Transfert 3mL de la couche d'acétate éthylique dans un nouveau tube centrifuge et s'évaporer à sec par l'azote ou avion à 50℃.

6) Dissolvez les résidus secs en n-hexane 2mL, ajoutez 1mL de la solution redissolvante diluée, mélange correctement pendant 30 secondes, centrifugeuse à au-dessus de 4000 r/min à la température ambiante (℃ 20-25) pour la minute 10 ; Enlevez la phase de n-hexane de -couche (s'il y a d'émulsification, après élimination de la phase de n-hexane de -couche, incube l'échantillon au bain d'eau 70℃ pour 10-20min, le centrifuge à plusieurs reprises).

7) Prenez à 50 le µL du inférieur pour l'analyse.

Pli de la dilution de l'échantillon : 2

b) Miel

1) Pesez 2± 0.05g de l'échantillon homogénéisé (miel), ajoutez 4mL de l'eau distillée, 0.5mL 1 M HCI et 100 le µL 2-Nitrobenzaldehyde (C7H5NO3) à chaque tube, secouent correctement pour 2min ;.

2) Incubez le ℃ at37 au-dessus de la nuit (heures approx16) ou incubez at56℃ par le bain d'eau (2 heures).

3) Ajoutez 5mL 0.1M K2HPO4, NaOH de 0.4mL 1M et 6mL l'acétate éthylique à chaque tube, secousse pour 30s.

4) Centrifugeuse à 4000r/min ci-dessus à la température ambiante (20-25℃) pour 10min (s'il y a d'émulsification ou la couche d'acétate éthylique n'est pas assez pour 3ml, n'incube pas l'échantillon au bain d'eau 80℃ pour 10min et centrifugeuse à plusieurs reprises ; ou augmentez la vitesse et prolongez la période de la centrifugeuse).

5) Transfert 3mL de la couche d'acétate éthylique dans un nouveau tube centrifuge et s'évaporer à sec par l'azote ou avion au ℃ 50.

6) Dissolvez les résidus secs en n-hexane 2mL, ajoutez 1mL de la solution redissolvante diluée, mélange correctement pendant 30 secondes, centrifugeuse à au-dessus de 4000r/min à la température ambiante (℃ 20-25) pour la minute 10 ; Enlevez la phase de n-hexane de -couche (s'il y a d'émulsification, après élimination de la phase de n-hexane de -couche, incube l'échantillon au bain d'eau 70℃ pour 10-20min, le centrifuge à plusieurs reprises).

7) Prenez à 50 le µL du inférieur pour l'analyse.

Pli de la dilution de l'échantillon : 1

 

6. Procédures d'ELISA

 

6,1 instructions

1) Apportez tous les réactifs et bandes micro-bien à la température ambiante (℃ 20-25) avant emploi ;

2) Renvoyez tous les réactifs au ℃ 2-8 juste après l'utilisation ;

3) La reproductibilité de l'analyse d'ELISA, dans une large mesure, dépend de la cohérence du lavage de plat. L'opération correcte du lavage de plat est le point clé dans ELISA les procédures ;

4) Pour l'incubation aux températures constantes, tous les échantillons et réactifs doivent éviter l'exposition à la lumière, et chaque microplate devrait être scellé par la membrane de couverture.

 

6,2 procédures d'opération

1) Apportez le kit d'essai à la température ambiante (℃ 20-25) pour au moins 30min, notez que chaque réactif doit être secoué pour se mélanger également avant emploi, mettez les bandes micro-bien requises dans des cadres de plat. A rescellé le microplate inutilisé, magasin au ℃ 2-8, non congelé.

2) Préparation de solution : 40mL dilué du tampon de lavage concentré 20 par × avec de l'eau désionisé à 1h19 1 (tampon de lavage concentré par × de 1 partie 20 + 19 parts d'eau désionisée). Ou préparez comme nécessaire.

3) Numérotation : nombre les micro-puits selon les échantillons et la solution étalon ; chaque échantillon et solution étalon devraient être exécutés en double, enregistrent leurs positions.

4) Ajoutez 50µL de l'échantillon ou de la solution étalon dans les puits en double distincts ; ajoutez le conjugué puis 50µL de la solution de fonctionnement d'anticorps dans chaque puits, mélange des enzymes 50ul doucement en secouant le plat manuellement. Scellez le microplate avec la membrane de couverture, andincubate au ℃ 25 pour 30min.

5) Versez le liquide hors du microwell, aileron pour sécher sur le papier absorbant, ajoutez 250µL/well de tampon de lavage pour laver le microplate pendant des 15-30s, puis sortez et agitez-vous pour sécher avec le papier absorbant, répétez 4-5 fois. (S'il y a les bulles après le battement, les a coupées avec les astuces propres).

6) Coloration : ajoutez 50µL du substrat A et puis 50µL du substrat B dans chaque puits. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement, puis incubez au ℃ 25 pour la minute 15 à l'obscurité pour la coloration.

7) Détermination : ajoutez 50µL de arrêtent la solution dans chaque puits. Mélangez doucement en secouant le plat manuellement. Placez la longueur d'onde du lecteur de microplate à 450nm pour déterminer la valeur d'OD de chaque puits. (Recommandez de lire la valeur d'OD au 450/630nm à double longueur d'onde d'ici 5 minutes).

 

7. Jugement de résultat

 

Il y a deux méthodes pour juger les résultats : le premier est le jugement approximatif, alors que le deuxième est la détermination quantitative. Note que la valeur d'OD de l'échantillon a une corrélation négative avec le contenu d'AHD.

7,1 détermination qualitative

La gamme de concentration (ng/mL) peut être obtenue à partir de comparer la valeur moyenne d'OD de l'échantillon à celle de la solution étalon. Supposer que la valeur d'OD de l'échantillonⅠ est 0,3, et ce du Ⅱ témoin est 1.0ppb, la valeur d'OD des solutions étalons est : 2,243 pour 0ppb, 1,816 pour 0.04ppb, 1,415 pour 0.12ppb, 0,74 pour 0.36ppb, 0,313 pour 1.08ppb, 0,155 pour 3.24ppb, en conséquence la gamme de concentration du Ⅰ témoin est 1,08 à 3.24ppb, et ce du Ⅱ témoin est 0,12 à 0.36ppb.

7,2 détermination quantitative

Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance est obtenues pour la valeur moyenne d'OD (b) de l'échantillon et de la solution étalon divisés par la valeur d'OD (B0) de la première solution étalon (0 normes) et plus tard multipliés d'ici 100%, c.-à-d.,

Pourcentage de valeur d'absorbance =	B	×100%
	B0

Valeur de moyenne de B-the (doubles puits) OD de l'échantillon ou de la solution étalon

Valeur de la moyenne OD de B0-the de la solution étalon 0ng/mL

Dessinez la courbe standard avec les pourcentages d'absorption de la solution étalon et les valeurs de semilogarithm de la solution étalon d'AHD (ng/mL) comme y et axe des abscisses, respectivement. Lisez la concentration correspondante de l'échantillon provenant de la courbe standard en incorporant son pourcentage d'absorption dans la courbe standard. La valeur en résultant est plus tard multipliée par le pli correspondant de dilution, obtenant finalement la concentration d'AHD dans l'échantillon.

 

8. Précautions

 

1) La température ambiante est inférieure que 25℃ ou la température et l'échantillon de réactif ne sont pas retournés à la température ambiante (20-25℃), qui fera diminuer la valeur standard d'OD.

2) Pendant le procédé de lavage, le séchage du microplate sera accompagné de la non-linéarité de la courbe standard et de la reproductibilité insatisfaisante ; , procédez donc à la prochaine étape juste après le lavage.

3) Mélangez bien, autrement il y aura de reproductibilité pauvre.

4) Arrêtez la solution est solution acide sulfurique de 2 M, évitent le contact avec la peau.

5) N'employez pas le kit au delà de la date d'échéance. L'utilisation des réactifs dilués ou frelatés du kit peut avoir comme conséquence les variations des valeurs de sensibilité et de détection OD. Ne remplacez pas les réactifs dans différentes séries de kits.

6) Rescellez les microplates inutilisés dans les sacs à obturation automatique. Les solutions étalons et les coupleurs sans couleur sont sensibles à la lumière et ne peuvent pas être directement exposés pour s'allumer.

7) Jetez n'importe quelle solution de teinture dont la couleur indique que la solution a dégradé. Une valeur de détection de moins de 0,5 pour la solution étalon 1 (0 ppb) indique la dégradation.

8) La température optimale de réaction est 25℃, et la sensibilité de détection et la valeur d'OD changeront si la température est trop haute ou si basse.

 

9. Date de stockage et d'échéance

 

Stockage : magasin au ℃ 2 à 8, non congelé.

Date d'échéance : 12 mois ; la date de la production est sur la boîte.

Note : Si l'emballage sous vide du microplate a la fuite, il est encore valide pour employer, n'affectent pas le résultat d'essai, soit de détendre pour employer.

 

 

Q1 : Quand sera-t-il embarqué ?
A1 : Nous embarquerons les marchandises pour vous dès que possible dans un délai de 7 jours ouvrables après réception du paiement. (En cas de l'épidémie et d'autres facteurs externes, il peut y avoir des retards dans l'expédition)

 

Q2 : Soutient-il OEM/ODM ?
A2 : Il peut être soutenu, mais la quantité spécifique doit être plus de 100 000 morceaux pour faciliter les produits adaptés aux besoins du client.

 

Q3 : Comment votre usine va-t-elle en termes de contrôle de qualité ?
A3 : Nous faisons certifier ISO9001 et ISO13485 par l'état. Notre processus de fabrication est conforme au processus standard, qui peut s'assurer que la qualité des produits est optimale.

 

Q4 : Comment est service après-vente a fourni ?
A4 : Nous fournissons le service après-vente technique en ligne professionnel. Nous pouvons te fournir des conseils faces à face sous forme de vidéo, d'appels téléphoniques, etc.

 

Q5 : Quelle est la méthode de paiement ?
A5 : Nous recevons le paiement par T/T.

 

Q6 : Comment se transporter ?
A6 : En obtenant des citations de nos beaucoup de transporteurs coopératifs, choisissez la meilleure manière de se transporter pour vous, ou vous pouvez vous transporter selon vos conditions.