Lait rapide 96Wells/Kit ISO9001 de détection d'ELISA Milk Test Kit For de mélamine

Kit de test ELISA de mélamine pour le lait de détection 96Wells/Kit ISO9001

 

1. Principe

Ce kit de test est basé sur le test immuno-enzymatique compétitif indirect pour la détection de la mélamine dans l'échantillon.L'antigène de couplage est pré-enduit sur les bandes de micropuits.La mélamine dans l'échantillon et les antigènes de couplage pré-enduits sur les bandes de micropuits entrent en compétition pour les anticorps anti-mélamine.Après l'addition du conjugué enzymatique, le substrat TMB est ajouté pour la coloration.La valeur de densité optique (OD) de l'échantillon de test a une corrélation négative avec la concentration de mélamine dans l'échantillon.Cette valeur est comparée à la courbe standard et la concentration en mélamine est ensuite obtenue.

 

 

2.Kit de test de laitComposants

1	Barrettes de micropuits	12 bandes dont 8 amovibles puits chacun
2	6× solution étalon (1 ml chacune)	0ppb	0,5 ppb
		1,5 ppb	4,5 ppb
		13,5 ppb	40,5 ppb
3	Solution standard de dopage	1 ppm	1 ml
4	Conjugué enzymatique	7ml	une casquette rouge
5	Solution de travail d'anticorps	7ml	casquette bleue
6	Substrat A	7ml	Bonnet blanc
sept	SubstratB	7ml	casquette noire
8	Solution d'arrêt	7ml	casquette jaune
9	10x extraction d'échantillon Une solution	50ml	bouchon transparent
dix	20x solution B d'extraction d'échantillons	50ml	casquette bleue
11	Tampon de lavage concentré 20×	15ml	Bonnet blanc

 

3. Spécifications techniques

Sensibilité : 0,5 ppb

Température de l'incubateur : 25℃

Temps d'incubateur : 30min～15min

Limite de détection:

Beurre, bonbons, fromage 10ppb

Taux de réaction croisée :

Mélamine 100%

Taux de récupération:

Beurre 90±25%

Bonbons, fromage 95±25%

 

4. Matériel nécessaire mais non fourni

1) Équipements : lecteur de microplaques, imprimante, vortex, centrifugeuse, pipettes de mesure, balance (une sensibilité réciproque de 0,01 g), bain-marie de 70 ℃ ;

2) Micropipettes : monocanal 20~200 µL, 100~1000 µL ;et multicanal 30～300 μl ;

 

5. Prétraitement de l'échantillon

Instructions (les points suivants doivent être traités avant le pré-traitement)

1) Seuls les embouts jetables peuvent être utilisés pour les expériences et les embouts doivent être changés lorsqu'ils sont utilisés pour différents réactifs ;

2) Avant l'expérience, chaque équipement expérimental doit être propre et doit être re-nettoyé si nécessaire, afin d'éviter la contamination qui interfère avec les résultats expérimentaux.

Préparation de la solution

1) Extraction de l'échantillon Une solution

Diluer 10x l'échantillon d'extraction d'une solution avec de l'eau déminéralisée à 1:9 ;

2) Échantillon d'extraction de la solution B

Diluer 20x la solution d'extraction d'échantillon B avec de l'eau déminéralisée à 1:19.

 

5.1 Beurre

1) Prendre 1 g de beurre frais dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajouter 5 ml de solution d'extraction d'échantillon A, incuber au bain-marie à 70 ℃ pendant 5 min, agiter au vortex pendant 5 min, centrifuger à plus de 4000 tr/min à température ambiante pendant 5 min ;

2) Prenez 50 ul de liquide de couche inférieure pour analyse

Pli de dilution de l'échantillon : 5

5.2 Bonbons, fromage

1) Prenez 1 g d'échantillon frais dans un tube à centrifuger de 50 ml, ajoutez 5 ml de solution B d'extraction d'échantillon, incubez au bain-marie à 70 ℃ pendant 5 min, agitez au vortex pendant 5 min, centrifugez à plus de 4000 tr/min à température ambiante pendant 5 min ;

2) Prenez 50 ul de liquide de couche inférieure pour analyse

Pli de dilution de l'échantillon : 5

 

6. Procédures ELISA

6.1 Consignes

1 Amener tous les réactifs et barrettes de micropuits à température ambiante (20-25 ℃).

2 Remettez tous les réactifs à 2-8 ℃ immédiatement après utilisation.

3 La reproductibilité de l'analyse ELISA dépend dans une large mesure de la cohérence du lavage des plaques.Le bon fonctionnement du lavage des plaques est le point clé des procédures d'ELISA.

4 Pour l'incubation à température constante, tous les échantillons et réactifs doivent éviter l'exposition à la lumière, et chaque microplaque doit être scellée par la membrane de couverture.

6.2 Procédures d'exploitation

1)Amener le kit de test à température ambiante (20-25 ℃) pendant au moins 30 min, notez que chaque réactif doit être agité uniformément avant utilisation ;placez les barrettes de micropuits requises dans des cadres de plaques.Refermer la microplaque inutilisée, stockée à 2-8 ℃, non congelée.

2)Préparation de la solution : diluer 15 mL de tampon de lavage concentré 20 X avec de l'eau déminéralisée à 300 mL pour l'utilisation ;

3)Numérotation : numéroter les micropuits en fonction des échantillons et de la solution standard ;chaque échantillon et solution standard doit être effectué en double ;enregistrer leurs positions.

4)Ajouter 50 µL de l'échantillon/solution standard pour séparer les puits en double, puis ajouter 50 µL de conjugué enzymatique, puis ajouter 50 µL de solution de travail d'anticorps à chaque puits, agiter correctement, sceller la microplaque avec la membrane de couverture et incuber à 25 ℃ pendant 30 min ;

5)Vider le liquide des puits, laver la microplaque avec le tampon de lavage dilué à 250 µL/puits 5 à 6 fois.Tremper à chaque fois le puits avec le tampon de lavage dilué pendant 15 à 30 secondes puis rabattre pour sécher sur du papier absorbant (s'il y a des bulles après le battement, coupez-les avec les embouts propres).

6)Coloration : ajouter 50 µL du substrat A, puis 50 µL du substrat B dans chaque puits.Mélangez doucement en secouant la plaque manuellement et incubez à 25 ℃ pendant 15 minutes dans l'obscurité pour la coloration ;

sept)Détermination : ajouter 50 µL de la solution d'arrêt dans chaque puits.Mélanger délicatement en secouant la plaque manuellement.Réglez la longueur d'onde du lecteur de microplaques à 450 nm pour déterminer la valeur OD de chaque puits.(Recommander de lire la valeur OD à la double longueur d'onde 450/630nm dans les 5 min).

 

7. Jugement du résultat

Il existe deux méthodes pour juger les résultats;le premier est le jugement approximatif, tandis que le second est la détermination quantitative.Notez que la valeur OD de l'échantillon a une corrélation négative avec la teneur en mélamine.

7.1 Détermination qualitative

La plage de concentration (ng/mL) peut être obtenue en comparant la valeur moyenne de la DO de l'échantillon à tester avec celle de la solution standard.En supposant que la valeur OD de l'échantillonⅠ est de 0,3 et que celle de l'échantillonⅡ est de 1,0, la valeur OD des solutions standard est : 2,043 pour 0 ppb, 1,604 pour 0,5 ppb, 1,101 pour 1,5 ppb, 0,512 pour 4,5 ppb, 0,161 pour 13,5 ppb. , 0,055 pour 40,5 ppb, en conséquence la plage de concentration de l'échantillonⅠ est de 4,5 à 13,5 ppb, et celle de l'échantillon Ⅱ est de 1,5 à 4,5 ppb.

7.2 Détermination quantitative

Les valeurs moyennes des valeurs d'absorbance sont équivalentes au pourcentage de la valeur OD moyenne (B) de l'échantillon d'essai et de la solution standard divisée par la valeur OD (B0) de la première solution standard (0 standard) et ensuite multipliée par 100 %, C'est

 

Pourcentage de la valeur d'absorbance =	B	×100 %
	B0

 

B - la valeur moyenne de la DO (puits doubles) de l'échantillon de test ou de la solution standard

B0—la valeur OD moyenne de la solution standard 0ng/mL

Dessinez la courbe standard avec les pourcentages d'absorption des solutions standard et les valeurs semi-logarithmiques des solutions standard de mélamine (ng/mL) comme axe Y et X, respectivement.Lire la concentration correspondante de l'échantillon d'essai à partir de la courbe standard en incorporant son pourcentage d'absorption dans la courbe standard.La valeur résultante est ensuite multipliée par le facteur de dilution correspondant, obtenant finalement la concentration de mélamine dans l'échantillon.

 

8. Précautions

1)La température ambiante inférieure à 25 ℃ ou la température des réactifs et des échantillons de test n'étant pas ramenés à la température ambiante (20-25 ℃) conduira à une valeur OD standard inférieure.

2)La sécheresse de la microplaque dans le processus de lavage s'accompagnera des situations comprenant les courbes standard non linéaires et la reproductibilité indésirable ;Passez donc à l'étape suivante immédiatement après le lavage.

3)Mélanger uniformément, sinon il y aura la reproductibilité indésirable.

4)La solution d'arrêt est la solution d'acide sulfurique 2 M, éviter tout contact avec la peau.

5)Ne pas utiliser le kit au-delà de sa date de péremption.L'utilisation de réactifs dilués ou falsifiés provenant des kits entraînera des modifications de la sensibilité et des valeurs de DO de détection.Ne pas échanger les réactifs des kits de différents numéros de lot à utiliser.

6)Placer la microplaque inutilisée dans un sac auto-scellant pour le refermer.La substance standard et le chromogène incolore sont sensibles à la lumière et ne peuvent donc pas être directement exposés à la lumière.

sept)Jeter la solution de coloration avec n'importe quelle couleur qui indique la dégénérescence de cette solution.La valeur de détection de la solution standard 1 (0 ppb) inférieure à 0,5 indique sa dégénérescence.

8)La température de réaction optimale est de 25 ℃, et des températures trop élevées ou trop basses entraîneront des changements dans la sensibilité de détection et les valeurs OD.

 

9. Stockage et date de péremption

Stockage : stocké à 2-8 ℃, non congelé.

Date d'expiration : 12 mois ;la date de fabrication est sur la boite

Remarque : si l'emballage sous vide de la microplaque présente des fuites, il est toujours valable d'utiliser, n'affecte pas le résultat du test, détendez-vous pour l'utiliser.

 

 

Q1 : Combien de temps vous faudra-t-il pour expédier ?
A1 : généralement expédié sous 7 jours ouvrables.

 

Q2 : prenez-vous en charge OEM/ODM ?
A2 : peut être pris en charge.Nous pouvons personnaliser en fonction de vos besoins spécifiques et de quantités spécifiques.

 

Q3 : Comment se porte votre usine en termes de contrôle qualité ?
A3: Nous avons la certification ISO9001 et la certification ISO13485, jusqu'à présent tout le processus de production, nous avons des règles standard, nous nous conformons au comportement et aux lois pertinentes du gouvernement.

 

Q4 : Le service après-vente est-il garanti ?
A4: Nous fournissons un service après-vente technique en ligne professionnel.Si le produit échoue pendant l'expérience, nous pouvons fournir
conseils personnalisés par téléphone, vidéo et autres formulaires.

 

Q5 : Quelle est votre quantité minimum de commande ?
A5 : 1Kit.

 

Q6 : Quelle est la méthode d'expédition ?
A6: Il peut être expédié par exprès (FEDEX, UPS, DHL, EMS, etc.) ou par voie aérienne et terrestre. Veuillez confirmer avec nous avant de passer une commande.